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学会了这些,血液核酸提取、检测 so easy !
2024.06.20

01 血液样本检测的重要性和意义


血液是唯一与所有器官都有接触的组织,携带着有关机体的大量宝贵信息。在理论上,检测血液携带的 DNA、RNA、囊泡和细胞残骸可以帮助人们诊断和监控各种疾病。


通过检测血液样本中的基因表达、基因变异等信息,可以为诊断和治疗提供更为精准的数据支持。基因检测技术的应用已经渗透到多个领域,例如癌症筛查、遗传性疾病的检测和预测、个体化用药,以及肿瘤微转录组分析等。基因检测技术的进展为血液检测提供了更为全面和准确的信息,有助于提前发现某些疾病的风险,以便及时采取预防和治疗措施。


02 血液基因检测的临床应用


1.无创产前基因检测


新生儿出生缺陷不仅给家庭带来了沉重的负担,而且已经成为严重影响我国经济发展和人口素质的重要问题。一些特定的遗传性疾病往往在出生一定时间后才会表现出明显症状,因此初生儿早期的基因筛查能够帮助尽快在医学上进行早期干预,达到及早发现、及早治疗的效果。目前基因检测技术在生育健康领域主要应用在以下方面:胚胎植入前遗传学诊断(PGD)、无创产前检测(NIPT)、新生儿单基因遗传病检测。


2.肿瘤基因检测


基因测序技术对于肿瘤个体化治疗主要有两方面应用:一是检测患者携带的肿瘤基因,二是检测肿瘤靶向药的靶点。


3.血源筛查


研究表明通过核酸检测试剂,可将乙肝、丙肝和艾滋病病毒检出的平均“窗口期”由原来的56天、70天和22天,分别缩短25天、59天和11天左右。核酸检测与酶联免疫检测联合应用能进一步提高病毒检出率,降低相关传染性病毒感染的漏诊率或误诊率。


03 不同类型血液样本提取注意要点


1.通常可用EDTA-、柠檬酸-、ACD等抗凝全血,不使用肝素抗凝,因为肝素会对PCR扩增产生抑制。RNA建议尽快提取。DNA提取:抗凝全血在2-8℃可保存一个星期左右,-20℃保存三个月左右,-80℃可长期保存,但随保存时间的增加,DNA的得率和完整性会受影响。

2.全血样本需尽快分离出血清、血浆样本,分离后的血清、血浆置于-20℃可短期保存,-70℃可长期保存一年。

3.对冷冻全血需重复细胞裂解步骤,以保证将红细胞完全裂解,但会减少纯化所得DNA的量。

4.血凝块样本可置于-20℃冰箱内保存1个月,保存更长时间的样本置于-70℃冰箱内保存。保存过程中避免反复冻融。提取前,血液应在在37℃速融,轻柔颠倒混匀。

5.红细胞裂解后,一定要将红细胞碎片尽量去除,可通过多次洗涤白细胞沉淀。红细胞碎片残留太多会影响后期的PCR等操作。

6.在白细胞块中加入核裂解液后,保温过程中轻轻吹吸数次,有助于白细胞的裂解,可以大大提高得率。


04 提取试剂选择


在核酸提取试剂盒选择时,首先要考虑的是样本类型及提取的核酸种类,有针对性的选择提取效率高的试剂盒。如果要从血浆或血清中提取游离核酸或肿瘤cfDNA,或者外周血中有无细菌或病毒感染,一般都选择血浆或血清提取试剂。如果目标核酸丰度较低,需要较多的血浆或血清进行富集提取,则选择大体积的血浆或血清核酸提取纯化试剂。


如果以病原体核酸为提取目标,选取以血清或血浆为实验样本,即剔除了血细胞等杂质,又有利于提高核酸纯度,增加检测反应的灵敏性和稳定性。所以使用血清作为实验样本,可以进一步提高样本纯净度,提高游离核酸浓度,以便获得更为灵敏的检测结果。


威尼斯wns·8885556作为基因检测整体解决方案供应商,在分子诊断领域已自主研发完成多款核酸提取检测产品——ArchiPure系列提取产品、Archimed系列检测设备。


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病原体检测整体解决方案



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